Cy Dye SE（Cy 琥珀酰亚胺酯）

1 产品介绍

产品简介：

    Cy系列属于花菁类染料，其中Cy SE是非水溶性形式，Sulfo-Cy SE是磺酸化的高水溶性形式，两者属于单反应性染料。

    它们可溶于有机溶剂如DMSO、DMF等，被广泛用于标记肽、蛋白质和寡聚体等生物分子，特别是精细蛋白和易于变性的蛋白。Cy系列染料除了用于标记生物分子外，也常被用于动物活体成像。由于细胞和组织的自发荧光在近红外波段小，而近红外光在生物组织中的穿透深度较大，因此在检测复杂生物系统时，Cy系列染料能提供更高的特异性和灵敏度。同时，Cy系列染料还拥有紫外光区染料和同位素标记无法具备的生物安全性，有利于在活生物体中监控各种标记分子的分布。检测原理见图 1。

图 1 Cy Dye SE 标记原理

产品特点：

l稳定性强：荧光亮度高且抗淬灭性好；

l批间差小：产品为公司自研，批间差控制的好；

l选择灵活：提供多种颜色Cy-SE 染料，选择灵活方便。

适用范围：

    蛋白标记、寡核苷酸标记、多肽小分子标记

2 产品信息

3 产品参数

4 储存与运输

储存条件：-20 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考） 

自备材料

1. 耗材 超滤管

2. 试剂

(1) DMSO

(2) pH =8.3 的碳酸氢钠溶液

Cy SE 标记蛋白（常规方法）

(1)制备染料储存液

室温预热一管1 mg的 Cy SE ，在管中加入适量的无水 DMSO 或 DMF （不含胺） ，配制浓度为 10 mM 的染料储存液。适当条件下，可以涡 旋以便充分溶解染料。如果使用更微量的蛋白进行标记反应，那么染料 需要稀释至更低浓度。

注：剩余的染料储存液应于-20℃低温存放，以备后续使用。如果使用无水 DMSO 配制染料储存 液 ，那么染料至少可以保存一个月。

(2)计算染料用量

Cy SE 染料用量[mg] =8 ×标记蛋白质量 ×Cy SE 染料分子量 / 标记蛋白 分子量

注：“8”为染料蛋白摩尔比 ，是一个实验经验值 ，适用于常规的蛋白、多肽标记。

(3)用 pH 8.3~8.5 的缓冲液重悬待标记蛋白

推荐使用pH 8.3的0.1 M 碳酸氢钠溶液 ，或者0.1 M磷酸盐缓冲液，蛋白浓度控制在1~10 mg/mL时的标记效果较好 。注意pH控制在8.3~8.5之间。避免使用含有胺的缓冲液（有时可以使用 Tris，但不推荐使用）。

注：当进行大规模标记（几百毫克SE）时，注意由于 SE 的水解，混合物随时间趋于酸化。需要 监测 pH值 ，或使用更浓的缓冲液。

(4)将染料加入蛋白溶液中，并涡旋混匀，冰上过夜或室温反应至少4 h。

(5)选用适当方法纯化染料-蛋白共轭物凝胶过滤是普遍使用的一种大分子物质纯化的方法 ，另外，也可以选择沉淀或色谱法分离提纯，针对蛋白或核酸的纯化，也可选择乙醇或丙酮沉淀的方法。

(6)计算染料-蛋白共轭物浓度

染料-蛋白共轭物浓度的确定可通过以下公式计算：

C (mg/mL) ={[A280  - (Amax ×Cf)] / 1.4} ×稀释因子

1)C是指染料-蛋白共轭物浓度。

2)稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数。

3)A280 和 Amax 分别是指在 280 nm处的吸光度以及在吸收波长处的吸光 度。

4)Cf 是校正因子。

注：过柱洗脱的蛋白溶液直接用于吸光度检测可能浓度过大 ，因此需要稀释至约 0.1 mg/mL。 稀释倍数需要从起初抗体量以及蛋白液洗脱的总体积来进行预估。

(7)结合比例（ DOL）计算 DOL 通过下式计算：

DOL=（Amax ×Mwt ×稀释因子）/ (ε×C)

1)Amax ，稀释因子 ，C 值在(6)中已经明确。

2)Mwt是指蛋白的分子量。

3)ε是 Cy SE 的消光系数。

4)DOL值会上下波动，但也能得到很好的实验效果。

活体成像领域

(1)实验动物准备

根据实验需求准备需要活体成像的动物 ，动物分组、阴性对照、阳性对 照根据具体实验设置。

(2)成像

通过尾静脉注射、皮下注射、原位移植等方法接种 Cy Dye SE 或 Cy Dye SE 标记的生物分子或药物于动物体内。根据实验要求选择成像时间 ，对 实验动物全身或局部部位进行荧光扫描 ，记录动物体内发射荧光的成像 图片 ，分析荧光复合物（探针、药物）的分布情况。成像结束后 ，根据 实验需要 ，选择是否需要解剖内脏进行成像分析。

注 ：(1)实验动物于成像前 6 h 开始禁食 ，以降低因胃肠道食物引起的背景干扰。

(2)最佳用量和时间需要客户根据自己的仪器和药物试剂等条件优化。

6 注意事项

l溶解后的 Cy SE 溶液最好立即使用。

l荧光染料均存在淬灭问题 ，请尽量注意避光 ，以减缓荧光淬灭。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康 ，请穿实验服并戴一次性手套操作