1 产品基本信息

FT™ 提供多种性价比高的氨基反应染料 ，用于标记蛋白质和其他含胺化合物。PO Dye SE 可以与氨基基团反应生成稳定的酰胺键。

2 产品参数

光谱图

3 规格或纯度

1 mg

4 储存与运输

储存条件：-20 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

1. 实验材料

（1）蛋白溶液不可含有能与染料反应的胺类化学物质 ，如氨基酸、Tris、 BSA、明胶等。如果蛋白中含有此类化学物质 ，应用 pH~7.4 的 PBS 缓    冲液预先透析处理。低浓度(< 3 mM)叠氮化钠的存在不会产生干扰与标   记反应。

（2）溶液 A：PBS 缓冲液（pH 7.4）。

（3）溶液 B ：0.2 M NaHCO₃ 溶液 ，用 2 M NaOH 将 pH 值调至 9.0。

（4）溶液 C ：向 20 份溶液 A 中加入 1 份溶液 B ，得到 pH 8.3 的标记 缓冲液。保存在密封瓶中 ，该溶液可长期保持稳定。

（5）Sephadex G-25 凝胶过滤柱。

2. 标记方法和步骤

（1）将 1~5 mg 蛋白溶解在 1 mL 溶液 C 中。

（2）将 1 mg 染料溶解在 50–200 µL 无水、不含胺的 DMSO 中，充分 震荡混匀。

（3）取适当体积的染料加入蛋白质溶液中，使染料/蛋白的摩尔比在 3:1， 由于蛋白质和标记试剂的不同反应性 ，可能会发生变化。这可能需要优     化反应中使用的染料与蛋白质的比例 ，以获得所需的 DOL。

（4）室温孵育 1 h。对于 PO565(5) SE 建议孵育 18 h 以完成标记反应。

（5）用溶液 A 平衡葡聚糖凝胶 G-25 透析柱。

（6）将步骤（4）反应溶液加入柱子 ，并用溶液 A 洗脱。首先洗脱出来 的着色带是染料-蛋白结合物。

注：为防止洗脱后偶联物发生变性 ，可添加牛血清白蛋白(BSA)或其他稳定剂。

3. DOL 计算

DOL=c(dye)/c(protein)

=(Amax/εmax)/(Apro/εpro)

=(Amax·εpro)/[(A280–Amax·Cf)·εmax] a. εpro 为蛋白的摩尔吸光系数；

b. A280和 Amax 分别是指在 280 nm处的吸光度以及在最大吸收波长处的

吸光度；

c. Cf 是校正因子 ，参考上面表格；

d. εmax 为染料的摩尔吸光系数。

6 注意事项

l荧光染料激发与发射波长会受到溶剂的影响，使用不同溶剂，则激发与发射波长可能会发生变化。

l标记的蛋白如需储存，可以添加终浓度为 2 mM NaN₃ 作为防腐剂 ， 放置于 4℃避光保存。如需长期储存，请将溶液分成小份并在-20℃下冷 冻，避免反复冻融 ，尽可能保护染料偶联物免受光照。

l操作过程注意避光 ，搅拌速度应适当以避免产生气泡。

l层析柱装柱时 ，尽量使柱体均匀 ，柱面平整 ，无气泡、裂隙。

l上样时注意 ，当柱顶缓冲液与凝胶平面相切时再加样品 ，洗脱时 ，当样品走至与凝胶平面相切时再加洗脱液。

l影响标记效率的其他因素还包括：温度、反应时间、pH、荧光染料与蛋白的量等 ，需注意控制。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品， 不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康 ，请穿实验服并戴一次性手套操作。