逆转录产物无条带或条带很弱，是什么原因？如何解决？

● RNA 模板质量不佳：存在 RNA 降解（如操作过程中未严格防 RNase 污染）或纯度不够（如残留蛋白、EDTA、酚等杂质），影响逆转录酶活性与反应效率。解决方法：重新提取高质量 RNA，提取过程中严格使用 RNase-Free 耗材与试剂，纯化后检测 RNA 完整性（如琼脂糖凝胶电泳）与纯度（如 Nanodrop 检测 OD 值）。

● 引物设计不合理：预混液中的 Oligo (dT)₂₀VN 或随机引物无法有效结合 RNA 模板（如模板结构特殊或引物与模板存在错配）。解决方法：根据 RNA 模板类型优化引物，若为特殊结构 RNA，可尝试设计特异性引物替代预混液中的通用引物。

● 逆转录酶活性降低或失活：试剂储存不当（如反复冻融、储存温度不符合要求）导致逆转录酶活性下降。解决方法：更换新的 All-in-One RT Mix with DNase 试剂，严格按照 - 20 ℃保存要求储存，避免反复冻融。

● 反应体系添加错误或量不足：如漏加某一组分（如 DNase、5× RT All-in-One Mix）或模板 RNA 用量过少。解决方法：重新核对反应体系配方，确保各组分添加完整且用量符合要求，推荐按照说明书推荐的 50 ng~1 μg 范围添加模板 RNA。