转化效率低甚至是不长克隆都是由哪些原因造成的？

(1) 感受态细胞因为保存时间或者质量不佳会引起转化效率低下， 建议使用新制备的感受态细胞或者质量上佳的感受态细胞；

(2) 线性化载体或插入片段比例不佳。请严格按照说明书推荐的方法计算各组分用量，用琼脂糖凝胶电泳检测样品质量以及浓度；

(3) EDTA 等金属离子螯合剂会抑制无缝克隆实验；

(4) 胶回收制备，最后洗脱时需要用水洗脱，不能用 TE Buffer 进行洗脱，用于重组反应的胶回收产物要溶解于 ddH2O；

(5) 插入片段纯度差；

(6) 引物设计有误，设计时特别注意反向引物的序列顺序。