HRM 分析中，引物设计有哪些要点？

核心要点是 “短产物 + SNP 位点居中”：

l产物长度：较短的 PCR 产物可提高 HRM 分辨率，设计时尽量使产物长度在 80~300 bp 之间；若用于 SNP 分析，建议产物长度为 80~120 bp，单个碱基变化对短产物熔解行为的影响更显著，分辨率更高。

lSNP 位点位置：SNP 位点需尽量处在 PCR 产物序列的中间位置，避免位点靠近两端导致熔解信号差异不明显，影响分型准确性。

l非特异性控制：若引物较长易引发非特异性扩增，可通过提高延伸温度减少非特异性产物，避免其干扰 HRM 分析。