引起假阳性问题的原因是什么？该怎么解决？

 (1)消化液中含有EDTA或消化时间过长引起的假阳性。Annexin V 和PS的结合需要Ca2+，而EDTA是Ca2+螯合剂，使用含有EDTA的胰酶会造成假阴性。其次消化时间不宜过长，吹打细胞要轻柔，因为胰酶的过度消化和机械损伤都会引起细胞膜的损伤，造成假阳性。细胞消化下来后，建议在培养箱中再孵育30 min，使细胞膜恢复完整性，避免假阳性，或者将细胞保存在含2% BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

(2)如果样品来源于血液，必须去除血液中的血小板，因为血小板含有PS，能与Annexin V结合，干扰实验结果。建议：可以含有EDTA的缓冲液200 g 离心去除血小板，最后细胞多洗几遍，减小EDTA螯合钙离子产生的影响。

(3)神经细胞膜容易破坏外翻，导致假阳性，所以Annexin V/PI双染法流式检测细胞凋亡不适用于神经细胞。

(4)诱导时间过长。一般情况下诱导几个小时就可以出现早期凋亡，因此通常不需要处理大于48 h以上，诱导时间过长会使营养物质耗尽，导致细胞状态差，假阳性结果偏高。