荧光值过低或无荧光值是什么原因造成的？该怎么解决？

(1)荧光素酶的表达水平与启动子活性相关，正常表达水平下检测到的荧光值应在 105 数量级左右，若检测到的荧光值比较低或无荧光值，可从启动子活性、转染效率、检测过程这几方面进行考虑。

(2)转染效率低。

1)优化转染实验条件，用较易转染的质粒做阳性对照（如转染过表达荧光蛋白质粒）；

2)确保转染 DNA 的质量，可通过酶切或琼脂糖凝胶电泳的方法对 DNA 质量进行鉴定；3)选择活性较高，处于指数分裂期的细胞进行转染。

(3)启动子活性低或诱导失败。

1)转染后的细胞培养使用特异性诱导启动子的条件；

2)优化细胞的培养条件，提高荧光素酶的表达量；

3)更换强启动子（如 SV40、CMV）。

4)海肾荧光素酶基因作为内对照，其表达应不受时期、部位、环境影响，因此常用组成型表达的TK 启动子。

(4)样品裂解效率低。

1)细胞培养时间不宜过长，12~36 h 内最好，长时间培养后，细胞可能会难裂解。

2)加入的裂解液需足量，保证细胞能够充分裂解。

(5)检测过程操作不规范。

1)选择合适的检测仪器，能够检测化学发光或者生物发光的仪器都适用于该实验；

2)需加入足量底物，保证底物的饱和，否则会造成检测结果出现很大偏差；

3)室温反应。反应时各个组分（细胞裂解产物 ，底物工作液等）都需要调整到室温；

4)荧光素酶的半衰期一般约 30 min，加完底物后可立即检测，尽量在 30 min 内完成。

(6)底物氧化失效。

1)底物避光密封保存，萤火虫荧光素酶底物-20 ℃保存；海肾荧光素酶底物推荐-20℃保存；

2)反应工作液建议现用现配。