1 产品基本信息
产品名称(中文):通用预混型 SYBR Green qPCR Master Mix(化学法)
产品名称(英文):Universal Premixed SYBR Green qPCR Master Mix (Chemical)
产品编号:MF1806
2 规格或纯度
20 μL × 100 T,20 μL × 500 T
3 产品介绍
产品简介:
SYBR Green 是一种可紧密结合 dsDNA 双螺旋小沟区域的染料。当 SYBR Green 与 dsDNA 相结合时,荧光信号会显著增强,增幅可达 800-1000 倍,是 qPCR 实验中常用的荧光染料。凭借高灵敏度和出色的信噪比等优势,在基因表达差异分析、基因芯片等领域得以广泛应用。
产品特点:
l特异性强:灵敏度高,熔解曲线无双峰,拥有良好的特异性;
l信噪比高:SYBR Green 荧光值高,荧光信号强。
适用范围:定量 qPCR
4 储存与运输
储存条件:-20℃避光保存
运输条件:冰袋运输
5 使用方法(仅供参考)
l在 PCR 管中制备反应液
反应组分 | 20 μL 反应体系 | 终浓度 |
2× SYBR Green Master Mix | 10 μL | 1× |
F、R 引物 | 适量 | 0.2~1 μM |
模板 | 适量 | -- |
10× ROX | 适量 | 见表 1 |
H₂O | up to 20 μL | N/A |
注:DNA 模板添加量通常在 100 ng 以下,可根据实际样本情况进行调整。cDNA 为模板时添加量不超过 PCR 反应体系总体积的 10%;
(1) 引物终浓度可根据情况在 0.2~1 μM 间调整,通常为 0.6 μM。
l选择扩增程序并运行
(1) 两步法
程序 | 温度 | 时间 | 循环 |
预变性 | 95℃ | 120 s | 1 |
变性 | 95℃ | 5 s | 40 |
退火 | 60℃ | 30 s | 40 |
注:两步法适用于大多数引物 Tm 为 60℃的扩增。
(2) 三步法
程序 | 温度 | 时间 | 循环 |
预变性 | 95℃ | 120 s | 1 |
变性 | 95℃ | 5 s | 40 |
退火 | 60℃ | 15 s | 40 |
延伸 | 72℃ | 30 s | 40 |
注:三步法适用于退火温度低于扩增温度的扩增。如扩增片段引物较长,易引发非特异性扩增,可提高延伸温度来降低这种情况。
l实验数据整理与分析
6 注意事项
l使用前请将产品瞬时离心至管底,务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。
l退火温度根据引物 Tm 值设定,50-60℃为宜。引物 Tm 值及扩增温度应接近 60℃(且 50-60℃),这样可缩小退火与变性温度的差距,减少升温耗时,提高扩增效率。
l为精确测定 Ct 值,部分机型需添加 ROX,其推荐使用浓度见表 1。ROX 会干扰熔解曲线分析,为避免杂峰干扰,在应用软件的 “Passive Reference Dye” 中,不要勾选检测 ROX 荧光值选项,再进行数据收集与分析。
l本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。
l为了您的安全和健康,请遵循您所在常规实验室安全规定。
l引物设计不优:重新设计引物;
l引物浓度太高:适当降低引物浓度;
lcDNA 模板带有基因组污染:重新制备 cDNA 模板。
l扩增效率低:可尝试三步法程序,或重新设计引物;
l模板浓度低:减少稀释度重新实验;
l模板降解:重新制备模板,再进行实验。
反应管内可能有气泡,扩增前仔细检查反应管有无气泡残留。
通常是因信号太弱,系统矫正导致,可提高模板浓度后重新实验。
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