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通用预混型 SYBR Green qPCR Master Mix(化学法) MF1806

FluorTrace

产品货号:MF1806 储存条件:-20 ℃,避光(18个月)

产品介绍

1 产品基本信息

产品名称(中文):通用预混型 SYBR Green qPCR Master Mix(化学法)

产品名称(英文):Universal Premixed SYBR Green qPCR Master Mix (Chemical)

产品编号:MF1806

2 规格或纯度

20 μL × 100 T,20 μL × 500 T

3 产品介绍

产品简介:

SYBR Green 是一种可紧密结合 dsDNA 双螺旋小沟区域的染料。当 SYBR Green 与 dsDNA 相结合时,荧光信号会显著增强,增幅可达 800-1000 倍,是 qPCR 实验中常用的荧光染料。凭借高灵敏度和出色的信噪比等优势,在基因表达差异分析、基因芯片等领域得以广泛应用。

产品特点:

l特异性强:灵敏度高,熔解曲线无双峰,拥有良好的特异性;

l信噪比高:SYBR Green 荧光值高,荧光信号强。

适用范围:定量 qPCR

4 储存与运输

储存条件:-20℃避光保存

运输条件:冰袋运输

5 使用方法(仅供参考)

l PCR 管中制备反应液

反应组分

20 μL 反应体系

终浓度

2× SYBR Green Master Mix

10 μL

F、R 引物

适量

0.2~1 μM

模板

适量

--

10× ROX

适量

见表 1

H₂O

up to 20 μL

N/A

注:DNA 模板添加量通常在 100 ng 以下,可根据实际样本情况进行调整。cDNA 为模板时添加量不超过 PCR 反应体系总体积的 10%;

(1) 引物终浓度可根据情况在 0.2~1 μM 间调整,通常为 0.6 μM。

l选择扩增程序并运行

(1) 两步法

程序

温度

时间

循环

预变性

95℃

120 s

1

变性

95℃

5 s

40

退火

60℃

30 s

40

注:两步法适用于大多数引物 Tm 为 60℃的扩增。

(2) 三步法

程序

温度

时间

循环

预变性

95℃

120 s

1

变性

95℃

5 s

40

退火

60℃

15 s

40

延伸

72℃

30 s

40

注:三步法适用于退火温度低于扩增温度的扩增。如扩增片段引物较长,易引发非特异性扩增,可提高延伸温度来降低这种情况。

l实验数据整理与分析

6 注意事项

l使用前请将产品瞬时离心至管底,务必充分混匀,避免剧烈震荡产生过多气泡。

l退火温度根据引物 Tm 值设定,50-60℃为宜。引物 Tm 值及扩增温度应接近 60℃(且 50-60℃),这样可缩小退火与变性温度的差距,减少升温耗时,提高扩增效率。

l为精确测定 Ct 值,部分机型需添加 ROX,其推荐使用浓度见表 1。ROX 会干扰熔解曲线分析,为避免杂峰干扰,在应用软件的 “Passive Reference Dye” 中,不要勾选检测 ROX 荧光值选项,再进行数据收集与分析。

l本产品仅限于科研用途并且不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康,请遵循您所在常规实验室安全规定。

技术问答

熔解曲线多峰

    l引物设计不优:重新设计引物;

    l引物浓度太高:适当降低引物浓度;

    lcDNA 模板带有基因组污染:重新制备 cDNA 模板。

CT 值出现太晚

    l扩增效率低:可尝试三步法程序,或重新设计引物;

    l模板浓度低:减少稀释度重新实验;

    l模板降解:重新制备模板,再进行实验。

个别扩增曲线骤降

    反应管内可能有气泡,扩增前仔细检查反应管有无气泡残留。

扩增曲线不光滑

    通常是因信号太弱,系统矫正导致,可提高模板浓度后重新实验。

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