1 产品基本信息

产品名称：SatGreen qPCR Master Mix for HRM (2×)

产品编号：MF1844

2 规格或纯度

20 μL×100 T， 20 μL×500 T

注：组分 A 包含 SatGreen 染料、dNTP（脱氧核苷三磷酸）、PCR buffer（含 Tris 和 MgCl₂）、热启动 Taq 聚合酶。

3 产品介绍

产品简介：

本产品是一款适用于实时荧光定量 PCR（qPCR）和高分辨率熔解曲线（HRM）分析的专业试剂。其核心成分 SatGreen 是专为 qPCR 和 HRM 分析设计的新型双链 DNA（dsDNA）“饱和染料”，通过 “按需求释放” 机制选择性结合双链 DNA，能极大降低对 PCR 扩增的抑制作用，使双链 PCR 产物结合量达到饱和，且不会出现 SYBR Green 的染料重排问题，可精准区分扩增产物间单个碱基的差异。

产品用途广泛，可用于已知单核苷酸多态性（SNP）分析、未知突变基因扫描等；此外，产品中含 ROX Reference Dye，能消除信号本底，校正孔间荧光信号误差，方便用户根据不同型号荧光定量 PCR 仪选择对应浓度使用。

产品特点：

l高灵敏度：可精准探测 DNA 序列的细微差异，能识别单碱基变化，适配 HRM 分析对分辨率的高要求。

l低 PCR 抑制：对 PCR 扩增反应的抑制作用小，抑制效果远小于 SYBR Green I，保障扩增效率。

l高安全性：几乎不可穿透完整的细胞膜，无致突变性，生物安全性优于 SYBR Green I。

l兼容性好：与 SYBR Green I 光谱相似，可直接替代使用，无需更换仪器或更改实验步骤，降低方法迁移成本。

适用范围：

l实时荧光定量 PCR 实验

l高分辨率熔解曲线（HRM）分析

产品参数：

l结合 DNA 时：吸收波长（λabs）/ 发射波长（λem）= 500 / 530 nm

l未结合 DNA 时：吸收波长（λabs）= 471 nm

4 储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免强光照射

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

在PCR 管中制备反应液(置于冰上进行配制)｡

注:

(1) 引物终浓度可根据情况在0.2~0.5 μM 间调整，通常为0.3 μM;

(2) 由于HRM 具有很高的灵敏性，尽量保持不同样本之间有相同的模板量(1-50 ng 基因组DNA 或1-50 pg 微生物DNA)，同时使所有样本的Ct 值都低于30(21-25 较佳)，样本之间的Ct 值差异不应超过3｡

(3) 几种常见仪器的匹配ROX Reference Dye 浓度见下表：

设置反应程序，将反应液放入仪器，运行程序扩增。

l两步法

l三步法

注:

(1) 两步法适用于大多数引物Tm 为60 ℃的扩增；

(2) 三步法适用于退火温度低于扩增温度的扩增。如扩增片段引物较长，易引发非特异性扩增， 可提高延伸温度来降低这种情况｡

(3) 在熔解曲线分析时，一般设置为0.02~0.1℃收集一次荧光｡

(4) 先使用60℃30 sec 进行扩增，如出现非特异性扩增，可尝试在60-66℃范围内优化，提 高反应特异性｡

(5) 进行初次熔解曲线分析前，需确定每组PCR 产物的Tm 值｡进行熔解曲线分析时，熔 解曲线设置的温度范围应从65°C 到95°C，涵盖前期确定Tm 值整个范围｡确定熔解温 度Tm 后，在后续熔解曲线分析实验中，可以设置熔解程序的最高熔解温度比所有PCR 产物的最高熔解温度高5°C，最高熔解温度比所有PCR 产物的最低熔解温度低5°C，这 样可以减少HRM 分析所需的时间｡

6 注意事项

l本产品含荧光染料，荧光染料对光敏感，保存产品或配制 PCR 反应液时需严格避免强光照射，防止染料降解影响信号强度。

l本产品在 - 20℃不会冷冻，若运输或储存过程中意外冻上，需置于室温自然融化，融化后轻轻涡旋混匀，禁止剧烈振荡（避免酶活性降低），后续所有实验步骤需在冰上操作，防止试剂变质。

l配制反应体系时，需轻轻颠倒混匀各组分，禁止使用振荡器，尽量避免产生泡沫；泡沫会导致 PCR 管内体积不均、荧光信号采集异常，混匀后需瞬时离心，使管壁残留液体集中到管底。

l引物纯度直接影响反应特异性，低纯度引物易产生非特异性扩增产物，干扰 HRM 分析，建议使用 PAGE 级别及以上纯化的引物，使用前需通过电泳或分光光度计验证纯度。

l本产品仅限于科研用途，不得用于临床诊断、食品检测等非科研领域，且不得存放于普通住宅内，需存放在实验室专用试剂储存区（避光、-20℃条件）。

l为保障实验人员安全与健康，操作过程中需遵循所在实验室的常规安全规范，如佩戴一次性手套、护目镜，避免试剂接触皮肤与黏膜；若不慎接触，需立即用大量清水冲洗，必要时就医。