1 产品基本信息
产品名称(中文):SYBR Green I qPCR 染料 (20×in Water)
产品名称(英文):SYBR Green I qPCR Dye (20×in Water)
产品编号:MF1847
2 规格或纯度
1 mL
3 产品介绍
产品简介:
本产品是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色发射光的荧光染料。SYBR Green I与 dsDNA 结合后荧光信号会增强800~1000 倍,是一种常用的 qPCR 荧光染料。该染料可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。
产品特点:
l高信噪比:荧光亮度高,背景极低;
l批间差小:产品为公司自研,批间差控制的好;
l使用方便:我司提供多种浓度的染料,选择灵活方便。
适用范围:
实时定量PCR参比染料
4 储存与运输
储存条件:4℃避光保存,有效期见外包装
运输条件:冰袋运输
5 使用方法(仅供参考)
l建立如下实验体系
名称 | 体积 |
10×的无 Mg2+聚合酶缓冲液 | 5 µL |
50 mM MgCl2 | 2.5 µL |
2 mM dNTP | 5 µL |
20×SYBR Green I | 2.5 µL |
Taq DNA polymerase | 1~5 units |
F, R Primers | 各0.1~0.5 µM |
模板DNA | 适量 |
无菌超纯水 | 补足至 50 µL |
(1)提高 Mg2+浓度可以降低SYBR Green I对 PCR 反应的抑制作用。我们建议在用 SYBR Green I进行荧光 PCR 反应时,Mg2+浓度比无SYBR Green I的普通 PCR 反应高出 0.5~3 mM。
(2)DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的 DNA模板添加量。cDNA 作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的10%。
l执行实时定量 PCR 程序,采集荧光信号
程序 | 温度 | 时间 | 循环 |
预变性 | 95 ℃ | 2 min | 1 |
变性 | 95 ℃ | 5 s | 45 |
退火 | 50~60 ℃ | 5 s | |
延伸 | 72 ℃ | 25 s |
注:在该步骤进行荧光信号采集设置:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:
30 sec 以上:Applied Biosystems:Step One,StepOne Plus,7500Fast;Roche Applied Science:Light Cycler 480;Bio-Rad:CFX96;
31sec 以上:AppliedBiosystems:7300;
34 sec 以上:Applied Biosystems:7500。
l分析数据
6 注意事项
lSYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量 PCR 实验成功的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制 PCR 反应。所以一般在使用 SYBR Green I染料时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为 1×到 0.2×之间。
lSYBR Green I荧光染料随着时间的推移可能会在光照下褪色,从而导致敏感性下降,因此在存储和使用过程中应避光,原液建议分装成小管冻存,保存于-20℃,短期可以 4℃保存。
l本产品仅限于科研,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
l为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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