首页 > 产品中心 > 荧光染料 > 分子生物学 > 定量PCR

SYBR Green I qPCR 染料 (20×in Water) MF1847

FluorTrace

产品货号:MF1847 储存条件:4 ℃,避光

产品介绍

1 产品基本信息

产品名称(中文):SYBR Green I qPCR 染料 (20×in Water)

产品名称(英文):SYBR Green I qPCR Dye (20×in Water)

产品编号:MF1847

2 规格或纯度

1 mL

3 产品介绍

产品简介:

本产品是一种结合于 dsDNA 双螺旋小沟区域的具有绿色发射光的荧光染料。SYBR Green I与 dsDNA 结合后荧光信号会增强800~1000 倍,是一种常用的 qPCR 荧光染料。该染料可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。

产品特点:

l高信噪比:荧光亮度高,背景极低;

l批间差小:产品为公司自研,批间差控制的好;

l使用方便:我司提供多种浓度的染料,选择灵活方便。

适用范围:

实时定量PCR参比染料

4 储存与运输

储存条件:4℃避光保存,有效期见外包装

运输条件:冰袋运输

5 使用方法(仅供参考)

l建立如下实验体系

名称

体积

10×的无 Mg2+聚合酶缓冲液

5 µL

50 mM MgCl2

2.5 µL

2 mM dNTP

5 µL

20×SYBR Green I

2.5 µL

Taq DNA polymerase

1~5 units

F, R Primers

0.1~0.5 µM

模板DNA

适量

无菌超纯水

补足至 50 µL

(1)提高 Mg2+浓度可以降低SYBR Green I PCR 反应的抑制作用。我们建议在用 SYBR Green I进行荧光 PCR 反应时,Mg2+浓度比无SYBR Green I的普通 PCR 反应高出 0.5~3 mM。

(2)DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯度稀释,确定合适的 DNA模板添加量。cDNA 作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的10%。

l执行实时定量 PCR 程序,采集荧光信号

程序

温度

时间

循环

预变性

95 ℃

2 min

1

变性

95 ℃

5 s

45

退火

50~60 ℃

5 s

延伸

72 ℃

25 s

注:在该步骤进行荧光信号采集设置:请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置,几种常见仪器的时间设定如下:

30 sec 以上:Applied Biosystems:Step One,StepOne Plus,7500Fast;Roche Applied Science:Light Cycler 480;Bio-Rad:CFX96;

31sec 以上:AppliedBiosystems:7300;

34 sec 以上:Applied Biosystems:7500。

l分析数据

6 注意事项

lSYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量 PCR 实验成功的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制 PCR 反应。所以一般在使用 SYBR Green I染料时应根据实际情况优化使用浓度,反应的终浓度为 1×到 0.2×之间。

lSYBR Green I荧光染料随着时间的推移可能会在光照下褪色,从而导致敏感性下降,因此在存储和使用过程中应避光,原液建议分装成小管冻存,保存于-20℃,短期可以 4℃保存。

l本产品仅限于科研,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

技术问答

用户论文

文章名称
杂志
发表时间
学校/科研机构
影响因子
文章详情

相关推荐