1 产品基本信息

产品名称（中文）：Fluo-3 AM 钙离子荧光探针

产品名称（英文）：Fluo-3 AM Calcium Probe

产品编号：MX1426

2 规格或纯度

1 mg

3 产品介绍

产品简介：

Fluo-3 是一种广泛使用的长波长荧光钙指示剂。该指示剂的吸收波长为 506 nm，能被 488 nm 氩离子激光有效激发。在没有Ca²⁺存在的情况下，Fluo-3 基本上没有荧光，与Ca²⁺结合后，526 nm 波长处的荧光至少会增加 40 倍。

与 Fura-2 和 Indo-1 不同，Fluo-3 的激发和发射最大值在与Ca²⁺结合前后无明显变化，因此Ca²⁺的比率测量技术不适用于 Fluo-3。此外，由于 Fluo-3 与Ca²⁺的结合力比 Fura-2 和 Indo-1 弱，更适用于测量Ca²⁺尖峰时的高瞬态Ca²⁺浓度。

Fluo-3, AM 酯是 Fluo-3 的膜渗透形式，可通过孵育载入细胞，进入细胞后会被细胞质酯酶水解为 Fluo-3 游离酸。

产品特点：

l荧光亮度强：具有良好灵敏度，发光时间久，不易淬灭；

l选择灵活方便：可搭配公司其它试剂使用，方便灵活。

适用范围：

检测细胞内钙离子浓度

产品参数：

l外观:可溶于DMSO的橙红色固体

lEx/Em:506/526 nm(结合Ca²⁺后)

lCAS号:121714-22-5

l分子式: C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃

l分子量:1129.9

l分子结构图：

l光谱图：

4 储存与运输

储存条件：-20℃避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

(1) 用无水 DMSO 溶解 Fluo-3, AM ester，配制成 2~5 mM 的储液。

(2) 用 PBS 或 HBSS 等缓冲液稀释储液，制备 4 μM 的工作液。

注：为避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度。

(3) （可选）若探针进入细胞效果不佳，可向工作液中加入适量 20% Pluronic F-127 DMSO 母液，终浓度控制在 0.04~0.05%，防止探针聚集并促进其进入细胞。

注：①20%（w/v）Pluronic F-127 DMSO 母液配制：100 mg Pluronic F-127 中加入 0.5 mL DMSO，40~50℃加热 20~30 min 溶解，室温保存，勿冷藏；若有结晶析出，可重新加热溶解，不影响使用。② Pluronic F-127 会降低探针稳定性，仅建议在配制工作液时加入，不建议加入储液中。

(4) 取出预培养的细胞，除去培养基，用 PBS 或 HBSS 溶液洗涤细胞 3 次。

(5) 去除缓冲液，加入工作液，37℃培养 10~60 min。

注：首次实验若不确定孵育条件，建议尝试 37℃孵育 20 min，观察荧光效果；若细胞死亡较多，适当缩短时间或降低温度；若荧光强度太弱，适当延长时间。

(6) 去除工作液，用 PBS 或 HBSS 等缓冲液洗涤细胞 3 次，再用该缓冲液重悬细胞，制成1×10⁵ cells/mL的细胞悬液。

(7) 37℃培养 10 min，确保 AM 酯在细胞内完全去酯化。

(8) 进行荧光钙离子检测。

注：钙浓度与荧光的关系式为：[Ca²⁺]=Kd[(F-Fmin)/(Fmax-F)]，其中F是实验钙浓度下指示剂的荧光，Fmin是无钙时的荧光，Fmax是饱和钙浓度下指示剂的荧光。据报道，Fluo-3 在无细胞介质中的 Kd 为 325 nM，但 Kd 会受细胞中 pH 值、蛋白质浓度、离子强度、温度和粘度等因素影响，准确测量细胞内钙浓度需校准 Kd，详细信息可参阅参考文献。

6 注意事项

l若使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解 AM 酯体，降低探针进入细胞的效果；含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。

l荧光染料均存在淬灭问题，需尽量避光，以减缓荧光淬灭。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。