1 产品基本信息

产品名称（中文）：BCECF AM pH 荧光指示剂

产品名称（英文）：BCECF AM pH Indicator

产品编号：MX1427

2 规格或纯度

1 mg

3 产品介绍

产品简介：

BCECF AM pH 荧光指示剂是一种可穿透细胞膜检测细胞内 pH 的荧光染料。它本身无荧光，进入细胞后被酯酶剪切形成 BCECF 并滞留细胞内，在适宜 pH 条件下激发产生绿色荧光。最大激发波长约 503 nm、发射波长约 520 nm，实际检测推荐激发波长 488 nm、发射波长 535 nm。

该产品广泛应用于哺乳动物细胞、动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的体内 pH 检测，也适用于细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等涉及 pH 变化的过程研究。

产品特点：

l稳定性强：具有良好灵敏度，发光时间久，不易淬灭；

l使用方便：可搭配其他试剂使用，方便灵活。

适用范围：

测量大多数细胞的细胞质 pH 变化

产品参数：

l外观:可溶于DMSO 或DMF 的白色固体

lEx/Em:505/520 nm

lCAS 号:117464-70-7

l分子式:混合物l(C₃₀H₂₀O₁₁, C₃₅H₂₈O₁₅, C₄₀H₃₆O₉)

l分子量:688.6

l分子结构图：

l光谱图：

4 储存与运输

储存条件：-20℃避光保存；

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

l细胞染色操作

对于固体状态的BCECF AM，使用前请用适当体积的无水DMSO 溶解配制成一定浓度的储液,推荐浓度为5 mM。

(1) 用 HEPES 缓冲液制备约 10⁶个/mL 的细胞悬液；

(2) 向细胞悬液中加入 5 mM 的BCECF AM/DMSO 溶液（体积为细胞悬液的 1/1000），使终浓度为 5 μM；

注:①血清中可能含有内源性酯酶活性,因此应避免染色液中含有血清；

②脂胺可能会断裂AM 基团,阻止染料的加载,因此应避免染色液中含有氨基酸。

(3) 37℃培养 30 分钟；

(4) 用 HEPES 缓冲液清洗细胞 2~3 次；

(5) 使用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜检测荧光强度。

注：标记条件因细胞种类而异，实验前需确定最佳条件。

l组织样本染色操作

组织样本染色方法与哺乳动物细胞类似（如大鼠动脉、唾液腺、胰腺、肾脏，兔胃腺体等）：

(1) 将样本置于灌注室，以 1~5 μM 的BCECF AM工作浓度配制灌流液，灌注 5~60 分钟后，用普通灌流液充分洗涤；

(2) 测量细胞间质 pH 时，可直接注射 0.2~0.5 mM BCECF 酸获得短暂脉冲，待其扩散进入分离细胞或组织切片后，用荧光成像仪成像或电生理记录仪记录。

l其它类型细胞染色

(1) 细菌：革兰氏阳性菌和阴性菌可通过酸休克反应染色，即用 0.5 mM BCECF 酸溶于 5 mM HCl 溶液中处理细菌 5 分钟；冰上孵育可使染料滞留细胞内，乳糖刺激会导致染料快速流出；

(2) 酵母菌与真菌：10 μM BCECF AM孵育染色效果不理想，可能因酵母酯酶水解效率低、Neurospora Crassa 真菌内染料分布不均导致空泡堆积；

(3) 植物：2×10⁶ cells/mL悬浮原生质体用低浓度（10 nM）BCECF AM可均匀分布，高浓度（3 μM）BCECF AM加载到玉米根毛细胞后基本富集于液泡中。

6 注意事项

lBCECF AM对人体有害，操作时需小心，做好有效防护，避免直接接触或吸入；

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内；

l操作时遵守实验室常规安全规范，做好防护。