1 产品基本信息

产品名称（中文）：Ready-to-use Fluo-3 AM 钙离子荧光探针（2 mM）

产品名称（英文）：Ready-to-use Fluo-3 AM Calcium Probe (2 mM)

产品货号：MX1436

2 规格或纯度

50 μL

3 产品介绍

产品简介

Fluo-3 是一种广泛使用的长波长荧光钙指示剂。该指示剂的吸收波长为 506 nm，因此能被 488 氩离子激光有效激发。在没有Ca²⁺存在的情况下，Fluo-3基本上没有荧光，但当与Ca²⁺结合时，526 nm 波长处的荧光至少会增加 40 倍。与 Fura-2 和 Indo-1 不同，Fluo-3 的激发和发射最大值在与Ca²⁺结合前后都没有明显变化。因此，Ca²⁺的比率测量技术不适用于Fluo-3，此外，由于Fluo-3与Ca²⁺的结合力比 Fura-2和 Indo-1弱，它更适用于测Ca²⁺尖峰时的高瞬Ca²⁺浓度。

Fluo-3 AM 酯是 Fluo-3 的一种膜渗透形式，可通过孵育载入细胞。然而，一旦进入细胞，它就会被细胞质酯酶水解为 Fluo-3 游离酸。

产品特点

l荧光亮度强：发光时间久，不易淬灭；

l选择灵活方便：可搭配我司其它试剂使用，方便灵活。

适用范围

检测细胞内钙离子浓度

产品参数

l外观：可溶于 DMSO 的橙红色固体

lEx/Em：506/526 nm (结合Ca²⁺后)

lCAS 号：121714-22-5

l分子式：C₅₁H₅₀Cl₂N₂O₂₃ 

l分子量：1129.9

l分子结构图：

l光谱图：

4 储存与运输

储存条件：-20℃避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

(1) 将溶液形式的Ready-to-use Fluo-3 AM Calcium Probe (2 mM)储液取出于室温回温。

(2) 用 PBS 或 HBSS 等缓冲液稀释Ready-to-use Fluo-3 AM Calcium Probe (2 mM)储液，制备 4 μM 的 Fluo-3, AM ester 工作液。

注：为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上使用最低探针浓度。

(3) （可选）如果进入细胞的效果不好，可向工作也中加入适量 20% Pluronic F-127 溶液，防止其在缓冲液中聚集并促进 Fluo-3 AM ester 进入细胞，Pluronic F-127 终浓度控制在 0.04~0.05%。

注：①20% (w/v) 的 Pluronic F-127 DMSO 母液配制：100 mg Pluronic F-127 中加入 0.5 mL DMSO，配制成 20% (w/v) 的 DMSO 母液。溶解需要在 40~50℃加热 20~30 min。溶解后室温保存，勿冷藏。如果有结晶析出，可以重新加热后溶解，不影响使用。

②Pluronic F-127 可降低染料的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储液中。

(4) 取出预培养的细胞，除去培养基，使用 PBS 或 HBSS 溶液洗涤细胞 3 次。

(5) 去除缓冲液，将工作液加入细胞中，37℃培养 10~60 min。

注：如果首次实验不能确定孵育温度和时间，建议尝试 37℃孵育 20 min，观察荧光效果。若细胞死亡较多，则适当缩短时间或降低温度；如果荧光强度太弱，则适当延长时间。

(6) 去除工作液，用 PBS 或 HBSS 等缓冲液洗涤细胞 3 次，然后用 PBS 或 HBSS 等缓冲液重悬细胞，制成 1×10⁵ cells /mL 的细胞悬液。

(7) 37℃培养 10 min，确保 AM ester 在细胞内的完全去酯化作用。

(8) 进行荧光钙离子检测。

注：钙浓度与荧光的关系式为：[Ca²⁺]=Kd[(F-Fmin)/(Fmax-F)]，其中F是实验钙浓度下指示剂的荧光，Fmin是无钙时的荧光，Fmax是饱和钙浓度下指示剂的荧光。据报道，Fluo-3 在无细胞介质中的 Kd 为 325 nM，但 Kd 会受细胞中 pH 值、蛋白质浓度、离子强度、温度和粘度等因素影响，准确测量细胞内钙浓度需校准 Kd，详细信息可参阅参考文献。

6 注意事项

l如果使用含有血清的培养基，血清中的酯酶会分解 AM ester 体，从而降低进入细胞的效果。另外，含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，加工作液前应尽量去除残留培养基。

l荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

l本产品容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后开封。由于试剂极微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。

l产品遇水极易分解，如果不能一次用完，建议将储液少量分装保存。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。