1 产品基本信息

产品名称（中文）：Hoechst 33258 死/活细胞 DNA 染料

产品名称（英文）：Hoechst 33258 Live/Dead Cell DNA Dye

产品编号：MX1482

产品规格：10 mg

2 产品介绍

Hoechst 33258 ，也称 bis Benzimide H 33258 或 HOE 33258 ，是一种非嵌入性的亮蓝色荧光染料。染料在溶液中荧光较弱，它们在活细胞中DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合后荧光变得明亮，所以此类染料也被称为DNA探针。因为背景低且染色非常稳定，对活细胞无毒，所以染色细胞不需洗涤步骤，结合DNA染色后可持续几天或更长时间。Hoechst 33258与Hoechst 33342 相比在水中的溶解度要高，但两种染料均具有高细胞膜渗透性，被广泛用于细胞凋亡检测 ，染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

以贴壁细胞（96孔板）举例，每孔 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度 5 µg/mL 计算，10 mg 配置为工作液大概可以用于20000个孔的染色。

产品特点：

l稳定性强：荧光亮度强且染料与DNA结合后发光稳定，持续时间长；

l使用方便：可与我司其他产品搭配使用，方便灵活；

l细胞毒性低：对活细胞无毒。

适用范围：

    核酸染色

3 产品参数

外观：白色/黄色/淡黄色固体

Ex/Em：352/461 nm（结合DNA）

Ex/Em：346/460 nm（未结合DNA）

CAS号：23491-45-4

分子式：C₂₅H₂₄N₆O•3HCl

分子量：533.9

分子结构图：

光谱图

4 储存与运输

储存条件：-20 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

1. 工作液配置

(1)向 EP 管中加入 1 mL ddH₂O 配置 10 mg/mL 储液。

(2)用 PBS 按照 1：2000 稀释 Hoechst 33258 储液至终浓度为 5 µg/mL 的工作液。

2. 染色

(1)对于固定的细胞或组织

1)对于细胞或组织样品 ，固定后适当洗涤去除固定剂。如需免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色 ，染色完毕后再按后续步骤进行 Hoechst 33258 染色。

2)对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258 工作液，覆盖住 样品即可。对于悬浮细胞 ，至少加入待测染色样品体积 3 倍的染色液 ， 混匀。室温放置 3~5 min。

3)吸除 Hoechst 33258 染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2~3次，每次3~5 min。

注：清洗步骤可选但不是必需的 ，清洗后不影响染色。

4)直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染 ，或呈碎块状致密浓染。

(2)对于活细胞或组织

1)加入适量 Hoechst 33258 工作液，充分覆盖待染色的样品，通常对于六孔板每孔需加入 1 mL 的染色液 ，对于 96 孔板每孔需加入 100 μL 的染色液。

2)室温避光孵育 10~30 min。

3)弃染色液 ，用 PBS 洗涤 2~3 次后添加 50 μL PBS 进行显微拍照。

注：清洗步骤可选但不是必需的，清洗后不影响染色。

6 注意事项

l使用前请将产品瞬时离心至管底 ，再进行后续实验。

lHoechst 染料通常用于染色哺乳动物细胞 ，但是也可以用来染色死活细菌，染色死活细菌时推荐在 PBS 或 150 mM 的 NaCl 中溶解为终浓度 12~15 μg/mL 的染色液室温染色 30 min。对酵母的染色较弱。通常对于死细胞的染色要比活细胞染色亮度高。

lHoechst 33258 染料溶于水时溶解度可达 10 mg/mL，用于细胞核染 色时，推荐的 Hoechst 33258 工作浓度为 0.5~10 μg/mL ，客户可根据实际染色情况对染色液浓度及染色时间进行调整。

l荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。