1 产品基本信息
产品名称(中文):Ready-to-use Cellumi™ 650 细胞膜荧光探针
产品名称(英文):Ready-to-use Cellumi™650 Cell Membrane Probe
产品编号:MX1485
2 规格或纯度
200 μL
3 产品介绍
产品简介:
Ready-to-use Cellumi™细胞膜红色荧光探针(DiD)是一种亲脂性碳菁类染料,能够有效、稳定地标记质膜及细胞内膜结构。它具有细胞毒性低且不会在细胞间转移的特性,与PKH类染料相比,Ready-to-use Cellumi™染料使用方便、着色均匀常被作为细胞融合、粘附、迁移的示踪分子。DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)和其它细胞膜荧光染料如 DiR(近红外荧光)、NIR680(远红外染料)配合使用,为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。
Ready-to-use Cellumi™系列染料也可以用于甲醛固定后细胞的染色,同时兼容在染色后的甲醛固定步骤。此系列染料不适用于细菌或酵母。激发发射光谱可参考 DiD,详情请见产品参数。
以每次使用 100 μL 染色工作液计算,200 μL 原液可以用 400 次。
产品特点:
l毒性低:毒性低,对细胞影响小;
l稳定性好:适合细胞示踪,可以在细胞内很好的保留;
l信噪比高:荧光亮度强、着色均匀且背景低;
l选择灵活:提供多种细胞膜染色试剂,选择方便灵活。
适用范围:
细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪
产品参数
Ex/Em:644/663 nm(MeOH)
分子式:C67H103ClN2O3S
分子量:1052.1
光谱图:
4 储存与运输
储存条件:4 ℃ 避光保存
运输条件:冰袋运输
5 使用方法(仅供参考)
一、自备材料
1. 耗材
(1)离心管 (2)盖玻片
2. 试剂
(1)无血清培养基或 HBSS 或 PBS (2)培养基(预温)
3. 仪器
荧光显微镜或流式细胞仪
二、操作步骤
工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。
1. 悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的培养基重悬细胞,使其密度为 1×106/mL,再按 1:200 的比例加入染色原液。
(2)37℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系。
(3)1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液,再次缓慢加入 37℃预热的培养基重悬细胞。重复两次。
2. 贴壁细胞染色
(1)配制染色工作液:每 1 mL 培养基中加入 5 μL 的染色原液,涡旋混匀。
(2)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上,培养结束后移出盖玻片,吸走过量培养液,但表面要保持湿润。
(3)在盖玻片的一角加入 100 μL 的染色工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育 5~10 min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。
3. 结果检测
样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
注:红色光激发,荧光显微镜滤光片可以选择 Cy5 滤光片;流式细胞仪选择 RL1(FL4)通道。
6 注意事项
l使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
l荧光染料均存在淬灭问题,实验操作时请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
l本产品仅限于科研,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品和药品,不得存放于普通住宅内。
l为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
Di 系列细胞膜染料均为亲脂类染料,经 TritonX-100 透化处理后,磷脂双分子层会被破坏,进而影响染料与细胞膜的结合,导致染色亮度降低;Di 系列染料较推荐用于活细胞的细胞膜染色。
不同细胞膜染料溶解度不同,需参考对应说明书,以下为常用细胞膜染料溶解度参考:
(1) DiO(货号MX1445):在 DMSO 中溶解度为 5 mg/mL(需超声 1~1.5 h + 60℃加热助溶),在 DMF 中溶解度为 10 mg/mL(需超声助溶);
(2) DiA(货号MX1493):在 DMSO 中溶解度为 2 mg/mL(需超声 1~1.5 h + 60℃加热助溶);
(3) DiD(货号 MX1457):在 DMSO 中溶解度为 25 mg/mL(需超声 1~1.5 h + 60℃加热助溶);
(4) DiI(货号 MX1448):在 DMSO 中溶解度为 12.5 mg/mL(需超声 1~1.5 h + 60℃加热助溶);
(5) DiR(货号MX1444):在 DMSO 中溶解度为 10 mg/mL(需超声 1~1.5 h + 60℃加热助溶);
此外,DMSO 受潮可能影响溶解度,建议尽量使用新开封的 DMSO。
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