DiA 细胞膜荧光探针

1 产品基本信息

产品名称（中文）：DiA 细胞膜荧光探针

产品名称（英文）：DiA Cell Membrane Probe

产品编号：MX1493

产品规格：50 mg

2 产品介绍

DiA 是一种亲脂性氨基苯乙烯基探针，在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，常与 DiI 一起用于细胞膜双色标记，适用于神经元膜示踪。

DiA 染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化。DiA 对固定细胞的染色效果优于 DiO。激发发射光谱图请见产品参数。

以每次使用 100 μL 染色工作液，染色工作液浓度 10 μM 计算，50 mg 配置为工作液大概可以用 63532 次。

产品特点：

l稳定性好：荧光亮度强且抗淬灭性好，可以在细胞内很好的保留；

l批间差小：产品为公司自研，批间差控制的好；

l使用方便：可搭配我司其它试剂使用，方便灵活；

l扩散速度快：扩散速度快，广泛应用于神经元组织追踪等。

适用范围：

    细胞膜荧光染料、神经元顺行和逆行示踪、细胞长期示踪。

3 产品参数

外观：可溶于DMSO的红色固体

Ex/Em：456/590 nm (MeOH)

CAS号：114041-00-8

分子式：C₄₆H₇₉IN₂ 

分子量：787.0

分子结构图：

光谱图

4 储存与运输

储存条件：4 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

一、自备材料

1. 耗材

(1)离心管 (2)盖玻片

2. 试剂

(1)无水DMSO或无水EtOH或无水DMF (2)无血清培养基或HBSS或PBS (3)培养基（预温）

3. 仪器

荧光显微镜或流式细胞仪

二、操作步骤

1. 染色液制备

(1)配制储液：储液用无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 配制，浓度 1~5 mM。DiA 在无水 DMSO 和无水 DMF 中的溶解度比在 EtOH 中的溶解度高。

注：1)未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融；

2)发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

(2)工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS 或 PBS）稀释储液，配制浓度为 1~30 μM 的工作液。最常用的工作液浓度为 5~10 μM。

注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为 1×10⁶/mL。

(2)37℃孵育细胞 2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。

(3)孵育结束，1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

(4)重复步骤(3)两次以上。

3. 贴壁细胞染色

(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

(2)从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。

(3)在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

(4)37℃孵育细胞 5~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。

(5)吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片 2~3 次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育 5~10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。

4. 结果检测

样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。

注：绿光激发，荧光显微镜滤光片可以选择 FITC（绿色）或者 Cy3（橙红色）或者 Cy3.5（深红色）滤光片；流式细胞仪选择 BL1（FL1）或者 BL2（FL2）。

6 注意事项

l使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

lDiA染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在 PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

l荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。