1 产品基本信息

产品名称（中文）：钙黄绿素 AM

产品名称（英文）：Calcein AM

产品编号：MX1477

2 规格或纯度

1 mg

3 产品介绍

产品简介：

Calcein AM 是一种对活细胞进行绿色荧光（Ex:490 nm，Em: 515 nm）标记的细胞染色试剂。在传统的 Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。Calcein AM 本身不发荧光，进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子 Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。由于死细胞缺乏酯酶，Calcein AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。与其它同类试剂（如 BCECF AM 和 CFDA）相比，Calcein AM 细胞毒性极低，不会抑制任何的细胞功能，如细胞增殖和淋巴球的趋化性等，是最适合用于活细胞染色的荧光探针。

作为核染色染料的碘化丙啶不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA 双螺旋从而产生红色荧光（Ex:535 nm，Em:617 nm），因此 PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein 和 PI-DNA 都可被 490 nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用 545 nm 激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein AM 可与碘化丙啶（PI）（MX1472）联合使用，用于活细胞和死细胞的同时检测或者直接购买 UE 提供的 Calcein AM/PI 活细胞 / 死细胞双染试剂盒（MX1541）。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，建议 Calcein AM 和 PI 的最适浓度也相应做出调整。

产品特点：

l稳定性强：荧光亮度强，发光时间久，不易淬灭

l使用方便：可搭配我司其它试剂使用，方便灵活

适用范围：

活细胞染色、细胞成像、细胞增殖和功能、细胞示踪、细胞计数

产品参数：

l外观：可溶于DMSO的灰白色固体

lCAS号：148504-34-1

lEx/Em：494/517 nm（pH=8）

l分子式：C₄₆H₄₆N₂O₂₃

l分子量：994.9

l分子结构图：

l光谱图：

4 储存与运输

储存条件：-20℃避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

(1) 用 DMSO 制备 1 mM 的 Calcein AM 溶液，并用 PBS 将其稀释制成 1~50 μM 的 Calcein AM 溶液。

注：不同的细胞适用的 Calcein AM 浓度不同，2 μM 的 Calcein AM 适用的细胞有 NIH3T3、PtK2、HeLa、MDCK 等。

(2) 染色 HeLa 等贴壁细胞时，先用 Trypsin-EDTA 等消化细胞，制备成细胞悬液。

(3) 将细胞悬液离心 3 min（1000 rpm）。

(4) 去除上清液，加入 PBS 缓冲液，细胞数量调整至 10⁵~10⁶/mL，再用移液器充分混匀。

注：由于培养基中的血清等含有酯酶，会分解 Calcein AM，导致空白背景数值上升，所以需要离心数次，用 PBS 洗涤数次直到完全洗净。

(5) 在 200 μL 细胞悬液中加入 50 μL 稀释后的 Calcein AM 溶液，在 37℃下孵育 15 min。

(6) 在盖玻片上滴加适量的染色的细胞溶液。用 490 nm 激发波长，515 nm 发射波长滤光片的荧光显微镜观察细胞。

注：如果 Calcein AM 很难进入细胞，可以使用表面活性剂处理，如 Pluronic F127。

6 注意事项

lCalcein AM 的酯键遇到湿气会分解，使用后请在 - 20℃下密闭冷冻保存，防止水分进入。

lCalcein AM 储备液稀释后请及时使用，尽量现配现用。

l由于 Calcein AM 在 PBS 等水溶液中不稳定，配制成工作液后需尽快使用。

l培养液中的血清和酚红对 Calcein AM 的染色有一定的影响，建议在加入 Calcein AM 工作液前充分洗涤细胞。

lCalcein AM 标记的细胞，荧光均匀，而且对短期细胞迁移示踪效果非常好，但荧光的持续时间与细胞类型、培养条件等因素相关，一般在几小时之内，而且有时也会被某些类型细胞迅速外排。如果需要长时间标记细胞，请使用 CFDA SE（MX1538）等荧光探针。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。