1 产品基本信息
产品名称(中文):qGreenPro™ dsDNA HS 定量试剂盒
产品名称(英文):qGreenPro™ dsDNA HS Assay Kits
产品编号:MF1815
2 规格或纯度
组分 | MF1815(100 assays) | MF1815(500 assays) |
A. qGreenPro™ | 250 µL | 1.25 mL |
B. qGreenPro™ 1×Buffer | 50 mL | 250 mL |
C. qGreenPro™ dsDNA标准液 1 | 1 mL | 5 mL |
D.qGreenPro™ dsDNA标准液 2 | 1 mL | 5 mL |
3 产品介绍
产品简介:
qGreenPro™ dsDNA HS 定量试剂盒是荧光检测 dsDNA 并进行定量的一种产品,这种检测方法非常灵敏,常用于分子生物学中 cDNA 文库的构建和亚克隆 DNA 片段的纯化。常规的 DNA 含量检测方法是在 260 nm 处测其吸光值,这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大,并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰,无法区分 DNA 和 RNA,而且灵敏度低 (5 μg/mL dsDNA 溶液 A260=0.1)。qGreenPro™ dsDNA HS 定量试剂盒检测方法简单方便,已成为生物制品残留 DNA 检测的标准。
qGreenPro™只有与 dsDNA 结合后才发出荧光,并且荧光强度与 DNA 浓度成正比。qGreenPro™ dsDNA HS 定量试剂盒检测浓度范围 10 pg/μL~100 ng/μL、检测质量范围 0.2~100 ng,且线性关系较好 (R²>0.99)。
产品特点:
l特异性好:特异性结合 dsDNA,对常规污染物具有耐受性;
l灵敏度高、范围广:检测浓度范围10 pg/μL~100 ng/μL,检测质量范围0.2~100 ng 且线性关系较好 (R²>0.99);
适用范围:
ldsDNA 定量
lNGS 二代测序
l文库构建
4 储存与运输
储存条件:4℃避光保存,有效期见外包装;长期保存可以储存在- 20℃;
运输条件:冰袋运输。
5 使用方法(仅供参考)
(1) 准备足够量的 0.5 mL 的可用于 Qubit 仪器的 Ep 管。
注:Qubit 仪器适用 Ep 管为透明的薄壁 Ep 管,Ep 管的侧面不要做标记,以免影响荧光值采集。
(2) 制定标准曲线:准备两个 Ep 管,每管加入 190 µL 配置好的 1× qGreenPro™ 工作液,再分别加入 10 µL 组分 C 和组分 D,涡旋震荡 2~3 s,震荡过程中不要产生气泡。
(3) 样本处理:干净的 Ep 管中加入一定体积的待测样本 (1~20 µL),然后加入相应体积的检测工作液使得每个检测样品的终体积为 200 µL,涡旋混匀。
注:样本检测浓度 / 样本质量接近检测上下限,会出现复孔重复性差,定量不准确的结果,建议通过预实验将样本调整至合适范围进行检测。
(4) 室温避光孵育 2 min。
(5) 按照 Qubit 荧光仪的操作说明,选择 dsDNA 高敏检测程序测定浓度。
6 注意事项
l使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。
l荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
l本产品仅限于科研,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
l为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
l本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
7 附录:耐干扰物质影响表
耐干扰物质名称 | 耐干扰程度 | 信号变化 |
琼脂糖 | 0.1% | 4% ↑ |
醋酸钠 | 30 mM | 3% ↑ |
NaCl | 200 mM | 30% ↓ |
苯酚 | 0.1% | 13% ↑ |
MgCl₂ | 50 mM | 33% ↓ |
尿素 | 2 M | 9% ↑ |
醋酸氨 | 50 mM | 3% ↓ |
乙醇 | 10% | 12% ↑ |
聚乙二醇 | 2% | 8% ↑ |
SDS | 0.01% | 1% ↓ |
曲拉通 | 0.1% | 7% ↑ |
BSA | 2% | 16% ↓ |
IgG | 0.1% | 19% ↑ |
ZnCl₂ | 5 mM | 8% ↓ |
氯仿 | 2% | 14% ↑ |
可能由以下原因导致,可按顺序排查:
(1) 产品使用前未恢复到室温,温度波动影响检测结果,需确保使用前将产品平衡至室温;
(2) 测定浓度时用手掌握住已孵育好的 EP 管,手部温度改变体系温度,应避免直接接触孵育后的 EP 管;
(3) 样本本身杂质过多,超过染料的耐干扰上限,需对样本进行进一步纯化处理。
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