1 产品基本信息

产品名称（中文）：一管化 RT Mix with DNase

产品名称（英文）：All-in-One RT Mix with DNase

产品编号：MF1801

2 规格或纯度

20 μL×20 T， 20 μL×100 T

注：5× RT All-in-One Mix 包含逆转录酶、RNA 酶抑制剂、dNTPs（脱氧核苷三磷酸）、Oligo (dT)₂₀VN 和随机引物等。

3 产品介绍

产品简介：

本产品构建了便捷的 RNA 合成 cDNA 系统，集成了第一链 cDNA 合成所需全套试剂，仅需添加 RNA 模板与水，即可启动逆转录反应，操作流程简单高效。合成的 cDNA 主要用于 qPCR 反应。

该预混液采用高效热敏感 DNase，高温下迅速不可逆失活，因此仅需一次加样便能在同一管内完成基因组 DNA 污染去除和逆转录反应。相较传统 DNase I 使用方法，无需额外添加 EDTA 失活，既降低了对 RNA 模板的损害和 RNase 污染风险，又有效节省了实验时间。

产品特点：

l迅速高效：特制高效 DNase，反转速度快，15 min 内最长可获得 12 kb 大小的 cDNA；

l操作简便：含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂、仅需一次加样且“一管化”操作。

适用范围：

转录组研究

4 储存与运输

储存条件：-20 ℃保存，避免反复冻融，以保证试剂活性。

运输条件：冰袋运输，确保运输过程中温度维持在低温环境，防止试剂变质。

5 使用方法（仅供参考）

反应体系配制：在冰上配制 20 μL 反应体系，各组分添加体积与要求如下

操作步骤

(1) 按照上述表格在冰上依次添加各反应组分，避免在室温下长时间放置试剂，防止 RNA 酶污染或试剂活性降低。

(2) 轻柔混匀各组分后，进行瞬时离心（短时间高速离心），使管内液体集中在管底，避免管壁残留导致反应体系不均。

(3) 将离心后的反应管放入 PCR 仪，按照以下条件设置反应程序：

l第一步：37 ℃孵育 2 min，目的是去除基因组 DNA 污染，避免其对后续 cDNA 合成与 qPCR 结果产生干扰。

l第二步：55 ℃孵育 15 min，启动逆转录反应，合成第一链 cDNA。

l第三步：85 ℃孵育 5 min，使热敏感 DNase 不可逆失活，同时终止逆转录反应，防止其对后续实验造成影响。

(4) 反应结束后，将获得的 cDNA 产物立即保存于 - 20 ℃长期储存；若需马上进行后续 qPCR 实验，可暂放于冰上短期保存。

6 注意事项

lRNA 模板的纯度和完整性是逆转录反应成功的关键。在逆转录操作中，若模板中混杂易导致 RNA 降解的杂质（如蛋白、EDTA、酚等），会抑制逆转录酶活性，进而影响逆转录效果，需严格控制 RNA 模板质量。

l后续 qPCR 实验中，逆转录产物的加量应不超过 qPCR 体系终体积的 1/10。若加量过多，会导致体系中残留的逆转录试剂（如 DNase、dNTPs）干扰 qPCR 反应，影响定量准确性。

l本产品的预混液不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。miRNA 长度较短（通常 20~24 nt），预混液中的 Oligo (dT)₂₀VN 和随机引物无法有效结合，需选择专门针对小 RNA 的逆转录试剂盒。

lcDNA 产物仅适用于 qPCR 反应，不适用于克隆等下游实验的长片段 PCR 扩增。若需进行长片段扩增或克隆，需选择具备高保真度且适用于长片段合成的逆转录试剂盒。

l本产品仅限于科研用途，不得用于临床诊断或其他非科研领域，且不得存放于普通住宅内，需存放在实验室专用试剂储存区。

l为了您的安全和健康，操作过程中请遵循所在实验室的常规安全规范，如佩戴一次性手套、护目镜，避免试剂接触皮肤与黏膜，若不慎接触，需立即用大量清水冲洗。