(1)EdU处理时间太短导致没有阳性信号。体外细胞实验一般EdU处理时间宜为细胞周期长度的1/5~1/10，阳性率约为20~30%，体内实验需根据目的组织细胞的增殖速度进行调整，若细胞增殖速度慢，需要采用长时间的EdU处理时间。

(2)EdU处理时细胞已经长得过满而产生接触抑制等情况使得细胞没有发 生增殖。

(3)实验时如果未使用完全培养基配制EdU培养基而是使用无血清培养基配制EdU培养基，可能会使细胞同步化在G0/G1期而导致没有阳性信号或阳性信号很少。

(4)染色过程干片等因素导致未染上信号。

(5)对于阴性结果，可设置阳性对照（常见肿瘤细胞株如A549、HeLa EdU处理2小时或EdU处理6小时以上的小鼠小肠上皮组织）以确认染色过程无误，对于目的样品，可先使用较长的EdU处理时间以尽量先检测出阳性信号，再根据具体信号比例进行EdU处理时间的调整。

(1)染色后洗涤不充分，可尝试加强洗涤解决。

(2)染色过程中干片，导致染料粘附严重。

(3)多聚甲醛固定时间过长而未使用甘氨酸中和。

(4)没有阳性信号而曝光过度导致背景严重。

(1)FT™ Dye Azide染色信号与核染色信号（Hoechst33342或DAPI等核染信号）完全重合，或者与核重合的信号明显强于胞浆上的信号（染料附着等）。

(2)一般部分细胞上的信号呈现上述特征，而不是全部细胞。

(3)对于流式细胞术检测，则是通过设置阴性对照样品（不做EdU处理但同时进行FT™ Dye Azide 染色），高于阴性对照样品信号强度的为阳性信号。