1 产品基本信息

产品名称（中文）：β-半乳糖苷酶细胞衰老染色试剂盒

产品名称（英文）：β-Gal Senescence Staining Kits

产品编号：MX1546

产品组分

注：E组分X-Gal溶液需避光保存。

2 产品介绍

细胞衰老（Cell Senescence）是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。通常情况下，机体会对衰老细胞进行清除，而未被清除的衰老细胞则可能会体内积累，引起低水平的炎症或进一步诱导临近组织衰退、癌变等。细胞衰老的一些特征包括细胞形态改变、细胞周期停滞、衰老相关分泌表型、大分子损伤及代谢紊乱等。目前，鉴别细胞衰老特异性最强的标志为衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence associated β galact osidase，SA-β-Gal），随着细胞的衰老其会逐渐累积，而在衰老前细胞、静止细胞和终末分化细胞中则是缺乏的。

本试剂盒利用衰老细胞中的β-Gal在pH为6.0时可以催化5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside，X-gal）水解生成蓝色物质，从而可在光学显微镜下观察到细胞或组织的衰老状况。

以贴壁细胞（6孔板）举例，每孔1 mL染色工作液，100 mL 可用于100个孔的染色。

产品特点：

l效果明显：蓝色物质明显，方便观察；

l稳定性好：可以耐受20次的反复冻融及短时间常温运输。

l稳定性好：荧光亮度强且抗淬灭性好；

适用范围：

细胞衰老检测

3 储存与运输

储存条件：-20 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

4 使用方法（仅供参考）

一、自备材料

1. 耗材

离心管

2. 试剂

(1)0.85%NaCl (2)0.7 mL异丙醇

3. 仪器

(1)分光光度计 (2)荧光显微镜 (3)流式细胞仪

二、操作步骤

1. 贴壁细胞染色（6孔板）

(1)细胞铺板过夜，待细胞生长至60~80%汇合度时可以进行实验。

(2)去除细胞培养液，用PBS清洗1次。

(3)加入1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定10~15 min。

(4)去除β-半乳糖苷酶染色固定液，用PBS清洗3次，每次2~3 min。

(5)根据表 1 配置染色工作液，具体染色工作液总量请根据样本类型、样本数等进行计算。

表 1 染色工作液

注：1)为减少样本染色过程中出现结晶现象，建议X-Gal使用前可适当37 ℃加热1~3 h。

2)染色工作液需要现配现用，并尽量在15 min内用完。

(6)去除PBS，每孔加入1 mL染色工作液，37 ℃无CO₂培养箱孵育过夜。

注：为防止液体蒸发影响染色结果，建议在边缘孔中加入水或PBS，减少“边缘效应”，同时用封口膜或保鲜膜封住孔板。

(7)普通光学显微镜下进行观察计数。

(8)可选：去除染色工作液，加入2 mL PBS，4 ℃可保存数天。

2. 悬浮细胞染色

(1)收集细胞，2500×g 离心10 min，用PBS清洗1次。

(2)加入1 mL β-半乳糖苷酶染色固定液，室温固定10~15 min。

注：可将细胞放置摇床上缓慢摇动，以避免细胞结团。

(3)2500×g 离心 10 min，去除β-半乳糖苷酶染色固定液，用PBS清洗3次，每次1~3 min。

(4)根据表 1 配置染色工作液，具体染色工作液总量请根据样本类型、样本数等进行计算。

(5)2500×g 离心 10 min，去除PBS。每管加入0.5~1 mL染色工作液，37 ℃孵育过夜。

(6)吸取部分细胞滴加到载玻片上或6孔板内，普通光学显微镜下进行观察计数。

(7)可选：去除染色工作液，再加入1 mL PBS，4 ℃可保存数天。

3. 染色效果图（图 1）

图 1 HeLa 细胞衰老效果图。（左）阴性，（右）阳性

6 注意事项

l使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

l细胞衰老β-半乳糖苷酶检测依赖于特定的pH条件，而CO₂培养箱中较高浓度的CO₂会影响染色工作液的pH值，因此，37 ℃孵育不能在CO₂培养箱中进行。

lX-Gal溶液在-20 ℃或4 ℃保存会冻结，室温或37 ℃水浴2~5 min并适当摇动即可完全融解，若需要分装该溶液或配置染色工作液，需要使用聚丙烯（PP）或玻璃材质的耗材，不要使用聚苯乙烯（PS）耗材，如细胞培养板、血清移液管等。

lβ-半乳糖苷酶染色液B的管底可能存在少量沉淀，属正常现象，请充分震荡涡旋，待全部溶解后再进行染色实验。

l本试剂盒理论上可以适用于冰冻切片样本，不适用于石蜡切片样本。如需染色切片样本，请参考相关文献并进行预实验摸索方案。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品和药品，不得存放于普通住宅内。

lβ-半乳糖苷酶染色固定液存在一定的毒性和腐蚀性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作，避免直接接触人体或吸入体内。