1 产品基本信息

产品名称（中文）：Calcein AM 细胞活力检测试剂盒

产品名称（英文）：Calcein AM Cell Viability Assay Kit

产品编号：MX1522

2 规格或纯度

25 μL ,500 μL

3 产品介绍

产品简介：

BCECF，AM是一种可以穿透细胞膜检测细胞内pH的荧光染料。BCECF，AM没有荧光，进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成BCECF，从而被滞留在细胞内在适当的pH值条件下可以被激发形成绿色荧光，最大激发波长和发射波长因pH的不同而有所不同，最大激发波长在503 nm左右，最大发射波长在520 nm左右，实际检测时推荐 使用的激发波长为488 nm，发射波长为535 nm。

BCECF，AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的体内pH水平检测。此外，在细胞内有pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF，AM也被广泛应用。

产品特点：

l稳定性好：荧光亮度高且抗淬灭性好；l批间差小：产品为公司自研，批间差控制的好；

l使用方便：我司提供多种细胞活力检测染料，选择灵活方便。

适用范围：

    活细胞荧光示踪探针

产品参数

CAS号：148504-34-1

Ex/Em：494/517 nm（pH=8）

分子式：C₄₆H₄₆N₂O₂₃

分子量：994.9

分子结构图：

光谱图：

4 储存与运输

储存条件：-20 ℃ 避光保存

运输条件：冰袋运输

5 使用方法（仅供参考）

1. Calcein AM 工作液的配置

(1)从冷冻状态下取出Calcein AM储存液原管，静置30 min使其恢复至室温。

(2)在10 mL的PBS缓冲液（无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲液等）中加入10 μL的2 mM Calcein AM储存液。

2. 细胞活力检测

(3)荧光显微镜或荧光酶标仪检测

1)按实验要求将细胞接种96孔培养板，推荐使用黑色板壁的培养板用于荧光检测。对于贴壁细胞，需在检测前一天铺板，并设定空白对照孔。

2)根据实验要求对细胞进行适当处理。

3)吸除每孔培养液，PBS清洗细胞1~2遍。

注：培养基中的血清可能含有酯酶活性，会增强背景荧光。用PBS清洗细胞，以降低残留血清的影响。

4)每孔加入100 μL的2 μM Calcein AM工作液。

5)37 °C避光孵育30 min或者更长时间。

注：不同的细胞最佳孵育时间有所不同，根据所用细胞对孵育时间进行适当优化以得到更加理想的染色效果。

6)孵育结束后，吸除培养液，用PBS清洗2~3次，然后加入无血清细胞培养液后即可在荧光显微镜下观察或荧光酶标仪检测。在荧光显微镜下 直接观察染色效果或在激发波长为485 nm，发射波长为530 nm的荧光检测仪测量培养板内的荧光。

注：整个过程均需避光操作。

(4)流式细胞仪检测

1)贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬，悬浮细胞直接使用，计数，取适量细胞1000~1500 rpm室温离心5 min，弃上清，加入适当体积的Calcein AM染色工作液，使细胞为单细胞悬液，并且细胞密度为约1×10⁶ cells/mL，每个样品体积为 1 mL。

注：需要准备好仅含缓冲液的细胞样品用作流式细胞仪检测时的阴性对照，该缓冲液与配制Calcein AM染色工作液的缓冲液宜保持一致。

2)37 ℃避光孵育30 min。

注：不同的细胞最佳孵育时间有所不同，根据所用细胞对孵育时间进行适当优化以得到更加理想的染色效果。

3)孵育完成后，1000~1500 rpm室温离心5 min收集细胞。每个样品加入1 mL缓冲液，轻轻重悬，1000~1500 rpm室温离心5 min收集细胞。

注：本步骤可去除多余染料及可能引起荧光淬灭的试剂。

4)用400 µL缓冲液重悬细胞。如有需要，也可进行进一步染色。染色后，将样品置于冰上，可以在1小时内进行流式细胞仪检测和分析。

注：整个过程均需避光操作。

5)注意使用仅含缓冲液的并且未经染色的细胞样品用于流式细胞仪的阴性对照设置。Calcein的最大激发光波长为494 nm，最大发射光波长为517 nm。

3. 结果展示

图 1 用Calcein AM Cell Viability Assay Kit定量HeLa细胞数。细胞在检测前24 h接种于96孔板内。

图 1荧光酶标仪结果图

6 注意事项

l使用前请将产品瞬时离心，再进行后续操作。

lCalcein AM遇到湿气会分解，使用后请在-20 °C下密闭冷冻保存，防止水分进入。

l荧光染料均存在淬灭问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

l本产品仅限于科研，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品和药品，不得存放于普通住宅内。

l为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。